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玉米赤霉烯酮免疫亲和柱吸附力高,柱容量大

产品型号:

更新时间:2020-07-08

简要描述:

上海飞测玉米赤霉烯酮免疫亲和柱吸附力高,柱容量大,适用于粮食及粮食制品、食品、饲料等样本中的ZEN净化处理,提高了样品的纯度,纯化后的提取液可用不同的分析方法测定。

  【产品用途】

  玉米赤霉烯酮(ZEN)免疫亲和柱适合于和HPLC、LC-MS及ZEN酶免分析试剂盒结合使用,定量检测ZEN。适用于粮食及粮食制品、食品、饲料等样本中的ZEN净化处理,提高了样品的纯度,纯化后的提取液可用不同的分析方法测定。

玉米赤霉烯酮免疫亲和柱

  【测定原理】

  玉米赤霉烯酮免疫亲和柱测定的基础是抗原抗体反应,抗玉米赤霉烯酮(ZEN)的单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上,样品中的ZEN经过提取、过滤、稀释,然后将样品提取液缓慢通过ZEN免疫亲和柱,在免疫亲和柱内,ZEN与抗体结合,洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。采用甲醇洗脱ZEN,然后进行相关分析。

  【所需材料】(不提供)

  (1)设备及器皿耗材:天平、粉碎机、离心机、涡旋混匀仪或摇床(转速≥200r/min);量筒、50mL玻璃漏斗、微量移液器(100μL~1000μL)、快速定性滤纸、玻璃微纤维滤纸(whatman934-AH,直径11cm,孔径1.5μm)、20mL玻璃注射器等。

  (2)试剂:甲醇(色谱级)、乙腈(色谱级)、lv化钠、蒸馏水或去离子水。

  【试剂配制】

  0.1%吐温20-PBS溶液:将0.1%吐温20-PBS粉末(厂家提供)直接用900mL水全部溶解后,用HCl或NaOH调pH至7.4,用水定容至1L。

  5M NaOH溶液:称取20gNaOH,溶于100mL水中。

  【样品制备及净化】

  (1)粮食及粮食制品

  ----准确称取40g(精确至0.01g)粉碎的样品,加入4glv化钠;

  ----与100mL乙腈-水溶液(9+1,v/v)混合,摇床振荡提取15min;

  ----用快速定性滤纸过滤或4000r/min,离心5min;

  ----准确移取10mL滤液或上清液,加入40mL水稀释,用玻璃微纤维滤纸过滤,至滤液澄清,备用;

  ----准确移取10mL混匀滤液(相当于0.8g样品)过亲和柱。

  (2)酱油、醋、酱及酱制品

  ----准确称取25g(精确至0.01g)样品到100mL容量瓶中;

  ----加入纯乙腈定容至100mL,摇床振荡提取15min;

  ----用快速定性滤纸过滤或4000r/min,离心5min;

  ----准确移取10mL滤液或上清液,加入40mL水稀释,用玻璃微纤维滤纸过滤,至滤液澄清,备用;

  ----准确移取10mL混匀滤液(相当于0.5g样品)过亲和柱。

  (3)酒类

  ----准确称取脱气酒类试样(含二氧化碳的酒类使用前先置于4℃冰箱冷藏30min,过滤或超声脱气)或其他不含二氧化碳的酒类试样20g(精确至0.01g)样品于50mL容量瓶中;

  ----加入纯乙腈定容至50 mL,摇床振荡提取15min;

  ----用快速定性滤纸过滤或4000r/min,离心5min;

  ----准确移取10mL滤液或上清液,加入40mL水稀释,用玻璃微纤维滤纸过滤,至滤液澄清,备用;

  ----准确移取10mL混匀滤液(相当于0.8g样品)过亲和柱。

真菌毒素免疫亲和柱

  (4)大豆、油菜籽及植物油

  ----准确称取40g(精确至0.01g)样品,加入4glv化钠;

  ----加入100mL乙腈-水(9+1,v/v),摇床振荡提取15min;

  ----用快速定性滤纸过滤或4000r/min,离心5min;

  ----准确移取10mL滤液或上清液,加入40mL水稀释,用玻璃微纤维滤纸过滤,至滤液澄清,备用;

  ----准确移取10mL混合滤液(相当于0.8g样品)过亲和柱。

  (5)饲料原料及成品料等

  ----准确称取20g(精确至0.01g)粉碎的样品,加入4glv化钠;

  ----加入100mL甲醇-水溶液(8+2,v/v),摇床振荡提取15min;

  ----用快速定性滤纸过滤4000r/min,离心5min,对于pH低于6.0的玉米加工副产物及饲料等的滤液或上清液,需要用 5M NaOH调pH至7.0左右;

  ----准确移取10mL滤液或上清液,加入30mL 0.1%吐温20-PBS稀释,用玻璃微纤维滤纸过滤,至滤液澄清,备用;

  ----准确移取5mL混匀滤液(相当于0.25g样品)过亲和柱。

  【亲和柱净化】

  注意:整个纯化过程尽量不要让柱子干燥!

  ----3mL柱管取出上方堵头,减去上堵头螺纹下突出部分,插回柱子上,另一端与20mL针筒固定后使用;将1mL柱管上方堵头取出后斜剪断,然后再插回柱子上(柱管内偶见有小气泡属正常现象,不影响亲和柱的使用);

  ----准确移取上述混合滤液,注入针筒中,调节针筒压力使其以2秒/滴的速度缓慢通过免疫亲和柱;

  ----用20mL水冲洗柱子(对于酱油、醋、油类以及饲料等颜色较深的样液,先用10mL 0.1%吐温20-PBS清洗,再用10 mL 10%甲醇-水冲洗柱子,用10mL水冲洗柱子。),流速1秒/滴,弃去流出液,直至2~3mL空气通过柱体,保证柱子内没有残余液体;

  ----准确加入2.0mL甲醇(色谱级)洗脱,流速自然重力,直至2~3mL空气通过柱体,保证柱子内没有残余液体。收集全部洗脱液,进行相关测定。

真菌毒素免疫亲和柱操作流程

  【检测方法】

  IAC-HPLC法检测

  ----过有机滤膜(孔径0.22μm)后,直接HPLC测定;或在50℃下用氮气缓缓地吹至近干,加入流动相混匀,过有机滤膜(孔径0.22μm)后,参照GB 5009.209-2016或GB/T 28716-2012条件进行HPLC测定。

  【注意事项】

  (1)玉米赤霉烯酮对人体有害,应戴手套操作。凡接触到标样的玻璃器皿都要用5%次lv酸钠浸泡过夜。

  (2)不要使用过有效期的免疫亲和柱。

  (3)免疫亲和柱应在2~8℃保存。不要冷冻。

  (4)使用前,免疫亲和柱需至少提前半小时回温至室温(25℃左右)。

  (5)HPLC测定值、试剂盒测定值接近zui高检出值时,样本的实际含量可能大于柱容量而造成流穿,建议减少上样体积或者将样品提取液用20%甲醇-水稀释后再上样。

  (6)称取的样品量以及提取液的体积可根据实际情况按比例调整,建议不少于10g样。

  (7)玉米赤霉烯酮对光线敏感,因此样品及其提取液应当低温(2~8℃)、避光保存。

真菌毒素免疫亲和柱

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